低（图a，c）。类似地，在bev组中，在抗ras治疗的患者中也观察到了相同的基质硬度降低（所有p＜）（图a，d）。此外，抗ras治疗组的硬度降低与特定治疗无关。单独的贝伐单抗治疗不影响lm内的col-i、asma和p-mlc2。为了评估抗血管生成治疗（贝伐珠单抗治疗）和ras抑制对血管系统的综合影响，我们测量了一大群crclm中的血管密度。与bev-组相比，bev+组的血管密度显着降低了%±%。然而，与非ras、bev+治疗相比以及与所有bev-组。这与使用的ras治疗类型无关。因此，抗ras药物靶向组织硬度，从而影响贝伐单抗的疗效。
8、通过ras和血管生成抑制减少ec增殖
?ec增殖随硬度增加而增加，vegf进一步诱导增殖，低硬度时vegf效应最高（图a-c）。此外，我们分析了在不同密度的纤维蛋白原基质（刚度的代表）中存在或不存在vegf的情况下ec发芽。ec发芽（芽的数量和长度）随密度增加。vegf导致在所有条件下进一步发芽，vegf在软基质中的作用更显着，如ec增殖的情况。
?为了了解抗ras药物和贝伐单抗的组合如何影响转移灶内的ec，我们量化了它们对ec增殖的影响。单独的贝伐单抗治疗导致ec增殖减少%±%。由于转移僵硬与独立于治疗的转移内的ec增殖相关，我们评估了ras抑制是否足以减少ec增殖。在未接受抗血管生成治疗的患者中，ras抑制并未显着降低ec增殖；然而，在接受贝伐单抗和抗ras药物治疗的患者中，ec增殖进一步降低了%±%）。
9、ras和血管生成抑制改善血管完整性
?有趣的是，vegf和基质硬化都有效地导致血管通透性。为了进一步表征抗ras药物对血管完整性的作用，我们通过对紧密连接蛋白zo-1（封闭小带1）进行免疫染色分析了它们对ec连接稳定性的影响。虽然建议贝伐单抗治疗导致消除未成熟血管，但我们观察到贝伐单抗对zo-1紧密连接没有变化（图a-b）。与之前在其他疾病模型中的发现一致，即增加基质刚度可增强内皮通透性，我们还观察到zo-1覆盖率与crclm的组织硬度之间存在负相关，表明在更硬的lm(图c)。在接受抗ras药物治疗的bev-患者中，我们还观察到ec中zo-1覆盖率的增加，表明单独的抗ras足以改善内皮连接稳定性（图a，d）。然而，在联合治疗（bev+和抗ras）中，对连接稳定性的影响大大